Prečo používame negatívnu kontrolu v PCR?

Prečo používame negatívnu kontrolu v PCR?
Anonim

odpoveď:

Pozri nižšie

vysvetlenie:

PCR pracuje s templátovou DNA. Povedzme, že testujete na HIV (HIV je vírus RNA, ale keď sa dostane do bunky, dostane sa do DNA …. takže v infikovanej bunke bude HIV DNA). Primery, ktoré použijete, vytvoria produkt (amplikón), ktorý zodpovedá časti HIV DNA. Ak vidíte tento amplikón, potom máte prítomnú sekvenciu HIV ….. ale ak nemáte negatívnu kontrolu, môžete mať kontamináciu.

PCR je extrémne senstitívna. Existuje mnoho riešení používaných v PCR (voda, tlmivý roztok, dNTP, enzým) … a všetky z nich sa môžu ľahko kontaminovať DNA z iných vzoriek, alebo dokonca z amplikónu, ktorý bol vyrobený v reakcii, ktorú ste urobili včera. Takže ak máte vzorku DNA pacienta X a kontrolujete HIV pomocou PCR, PCR priméry môžu produkovať produkt z DNA DNA vo vzorke DNA pacienta X (ak táto osoba má HIV), alebo môže spôsobiť, že sa z neho vytratí. kontaminácia. Ale nemôžete povedať, či je to z kontaminácie alebo z HIV v DNA pacientov.

Takže spustíte kontrolu vody. Trubica 1 umiestnite všetky zložky reakcie a pre DNA pridáte iba vodu. Toto je negatívna kontrola. Nič by sa tu nemalo zosilniť. V Tube 2 vložíte všetky reakčné zložky a DNA pacienta X. Ak tu dostanete produkt (a nič v Tube 1), pacient X má pravdepodobne DNA DNA vo svojej DNA. Ak dostanete produkt v skúmavke 1 aj v trubici 2, máte problém s kontamináciou a nemôžete zistiť, či HIV vo vzorke pacienta pochádza z choroby alebo z kontaminácie.

Takže vždy riadite vodu (voda namiesto DNA).