odpoveď:
Typicky ide o test špecifickosti protilátok.
vysvetlenie:
V teste ELISA je veľmi ťažké určiť, či je alebo nie je vaša protilátka viažuca sa na proteín, ktorý je predmetom záujmu, úplne iný proteín alebo celý rad proteínov.
Western blot sa použije na kontrolu špecifickosti protilátky (treba poznamenať, že Western blot nemusí detegovať všetky krížové reakcie s nesprávnymi proteínmi).
V Western blote vidíte veľkosť proteínu, na ktorý je protilátka viazaná (nemôžete v ELISA). Preto napríklad, ak by mala byť vaša protilátka viazaná na proteín s molekulovou hmotnosťou 56 kDa a na blote vidíte pás s veľkosťou ~ 56 kDa, môžete si byť primerane istý, že protilátka sa viaže na správny proteín.
Ak by ste na druhej strane videli pás s hodnotou 32 kDa, mohli by ste dospieť k záveru, že protilátka sa viaže na nesprávny proteín. Podobne, ak sa na Western blote objavili mnohé pásy, potom by to naznačovalo (v neprítomnosti degradácie proteínu), že protilátka sa viaže na rad rôznych proteínov.
V príklade 32 kDa pásu, ktorý sa objavuje na géli, a tiež viacnásobných pásov, by sa dalo predpokladať, že protilátke chýba špecifickosť pre test ELISA a že akékoľvek výsledky pozorované v teste ELISA nemusia byť špecifické pre požadovaný proteín.
Ak by som vykonal tento druh testu, môžem zahrnúť nejaký druh "interferujúceho" činidla na testovanie protilátky. Napríklad, ak som zvýšil svoju protilátku na peptid I, môže obsahovať peptid v primárnom roztoku protilátky na testovanie správnej väzby. To znamená, že v prítomnosti peptidu by som nemal vidieť žiadny pás alebo žiadny výsledok testu ELISA, pretože moja primárna protilátka by nebola schopná viazať sa v dôsledku prítomnosti nadbytku peptidu.