odpoveď:
Mnoho …
vysvetlenie:
Existuje mnoho dôvodov, prečo sa kapely nemusia objaviť na western blote. Pracovala vzorka a kombinácie protilátok v minulosti?
Nižšie sú len niektoré, o ktorých si v súčasnosti myslím, že môžu spôsobiť, že sa kapely nezobrazia:
-
Preniesol proteín z gélu? Skúste zafarbiť membránu niečo ako ponceau S alebo amido black, aby ste zistili, či sú prítomné kapely. Niekedy môžete vidieť proteínové pásy na membráne zmáčaním a držaním v uhle voči svetlu.
-
Pracuje primárna protilátka? To je ťažké vyskúšať a jediný spôsob, ako môžete je, je zahrnutím pozitívnej kontroly, kde viete, že máte prítomný proteín. Ak máte nejaký proteín, o ktorý máte záujem, môžete ho vyskúšať na membráne Western blotting (t.j. nechcete spustiť gél) a vidieť, či dostanete výsledok, ak spracujete membránu, akoby to bol western blot.
-
Je sekundárna protilátka rozpoznávajúca primárnu protilátku? Opäť tvrdý test. O jedinom teste, ktorý môžete urobiť, je bodový test uvedený vyššie v bode 2.
-
Pracuje "detekčný systém"? V závislosti od metódy detekcie, ktorú používate, by ste sa mohli pokúsiť o zvýšenie množstva sekundárnej protilátky, aby sa zistilo, či funguje detekčný roztok, ako aj spúšťacie činidlo / enzým na sekundárnej protilátke. To znamená, že môžete spustiť reakciu len so sekundárnou protilátkou?
Nakoniec by to mohlo byť tak jednoduché, ako jedno z riešení použitých pri snímaní sprisahania, ktoré je nesprávne zostavené. Napríklad, ak je koncentrácia soli v pufri nesprávna, môže to spôsobiť uvoľnenie protilátok z blotu. To isté by sa stalo aj vtedy, ak by pH pufrov bolo nesprávne.
"Najpodivnejšia" príčina pre western blot nefunguje, že som osobne zažil bol, keď sme zmenili dodávateľa sušeného mlieka sme použili na blokovanie membrány. Prášok od nového dodávateľa obsahoval fosfotyrozín fosfatázu, ktorá odstránila všetky fosfátové skupiny, ktoré sme sa snažili detegovať pomocou našej anti-fosfotyrozínovej protilátky.
Správna odpoveď je a = 9/2, ale ako by mohol byť zlomok, ak by George mohol získať iba body ako celé čísla?
Pretože "očakávaná hodnota" je priemer, nie počet. Pozrime sa na všetky možnosti, keď H je hlavami a T sú chvosty. {:( "Penny", "Dime", "nikel"), (H, H, H), (H, H, T), (H, T, H), (H, T, T), (T , H, H), (T, H, T), (T, T, H), (T, T, T):} Táto tabuľka vyčerpáva každú možnú možnosť, od hodenia troch hláv, až po hodenie troch chvostov. Teraz pridajme body, 3 body za každú inštanciu hádzajúcich hláv. {:( "Penny", "Dime", "nikel", "Body"), (H, H, H, 9), (H, H, T, 6), (H, T, H, 6), (H, T, T, 3
Keď bola Janeho brodivý bazén nový, mohol byť naplnený do 6 minút vodou z hadice. Teraz, keď má bazén niekoľko netesností, trvá len 8 minút, kým všetka voda unikne z celého bazéna. Ako dlho trvá naplnenie únikového bazéna?
24 minút Ak je celkový objem bazéna x jednotiek, potom sa každú minútu x / 6 jednotiek vody vloží do bazéna. Podobne x / 8 jednotiek vody unikajúcich z bazéna každú minútu. Preto (+) x / 6 - x / 8 = x / 24 jednotiek vody naplnenej za minútu. V dôsledku toho bazén trvá 24 minút.
Babička plánovala urobiť červenú, bielu a modrú deku. Jedna tretina mala byť červená a dve pätiny mali byť biele. Ak by plocha prikrývky mala byť 30 štvorcových stôp, koľko štvorcových stôp by bolo modrých?
8 štvorcových stôp Ak je 1/3 červená, potom 10 štvorcových stôp je červená. Ak sú 2/5 biele, potom 12 štvorcových stôp sú biele. 30-12-10 = 8