Prečo sa DNáza a lyzozým v lýznych krokoch používajú počas purifikácie proteínu?

Prečo sa DNáza a lyzozým v lýznych krokoch používajú počas purifikácie proteínu?
Anonim

odpoveď:

Na čistenie frakcie proteínov …

vysvetlenie:

Ak čistíte (často špecifický) proteín, budete sa musieť zbaviť čo najväčšieho množstva odpadu, ktorý by mohol byť na ne viazaný.

Záleží na miere, po ktorej bielkovine ste, ale vo všeobecnosti je to dobrý nápad, najmä v prípravný čistenie, aby sa zbavili čo najviac nečistôt.

1:

Keďže proteíny sú vo všeobecnosti veľké a následne sa objavia v nižších pásmach vašej (ultracentrifugovanej) frakcie, chcete sa zbaviť všetkých nukleových kyselín, najmä ak sa proteín, ktorý puryfying týka, týka podobných látok. Pol1, Reverzná transkriptáza alebo akýkoľvek iný enzým zapojený do replikácie / transkripcie / prekladu.

Nukleové kyseliny prítomné vo vzorke môžete oddeliť pomocou DNAsy: DNA sa úplne hydrolyzuje do jej základných častí.

Nezabúdajme, existujú rôzne DNAse, všetky sa líšia svojím mechanizmom a špecifickosťou pre svoj substrát. V závislosti na použitej DNAse môže vykazovať v- alebo exo- aktivita nukleázy …

Viac k bodu, RNáza Je vhodnejšia, pretože RNA je zvyčajne viac v rozsahu proteínov vztlaku / frakcie a môže byť viazaná na proteín.

2:

lyzozým: Enzým, ktorý má aspoň dve funkcie:

Deglykozyluje enzýmy: Väčšina bielkovín prenášaných v krvnom obehu je glykozylovaná: majú k nim niekoľko molekúl cukru. Lyzozým odstraňuje zvyšky cukru.

Má tiež schopnosť rozbiť bunkovú stenu baktérií grampozitívnych, čo ich spôsobuje lyžujú, (ak chcete čistiť proteín z grampozitívnych baktérií)

Akékoľvek degradované produkty, či už nukleové kyseliny alebo zvyšky cukru, sa objavia na horných frakciách skúmavky Centrifuge kvôli ich "ľahšiemu" vztlaku.