Čo v teste ELISA robia primárne protilátky a sekundárne protilátky?

Čo v teste ELISA robia primárne protilátky a sekundárne protilátky?
Anonim

odpoveď:

To závisí od typu testu ELISA.

vysvetlenie:

ELISA Enzymovo spojený imunosorbentný test.

Existujú rôzne typy testov ELISA. Čo potrebujete, je:

  • protilátky s enzýmom pripojeným k nej
  • antigén, na ktorý sa protilátka viaže
  • substrátu enzýmu, ktorý spôsobuje merateľnú reakciu

enzým na protilátku je často HRP (chrenová peroxidáza). HRP môže reagovať s rôznymi substrátmi, ktoré buď menia farbu alebo emitujú svetlo, merateľné.

Obrázok zobrazuje prehľad odlišné typy testov ELISA. Vysvetlím, ako fungujú nižšie.

Priama ELISA

Platňa je potiahnutá antigénom (Ag) a a primárna protilátka s enzýmom. Keď sa pridá substrát, reakcia sa uskutoční a je úmerná množstvu interakcií protilátka-antigén.

Nepriama ELISA

Platňa je opäť potiahnutá antigénom a a primárna protilátka viaže na antigén. secundary protilátky sa pridáva k prvej protilátke. Druhá protilátka obsahuje enzým, ktorý reaguje so substrátom.

Sendvičová ELISA

Sú tu zahrnuté dve alebo tri protilátky. Zachytávacia protilátka je pripojená na platne a viaže sa na antigén. Nasledujú rovnaké kroky ako buď priama (iba jedna protilátka) alebo nepriama metóda (dve protilátky).

Konkurenčná ELISA

Niekedy nazývaná inhibičná ELISA, je trochu zložitejšia. Platňa sa potiahne antigénom, ktorý sa má skúmať. primárna protilátka s enzýmom sa najprv inkubuje so vzorkou s neznámou koncentráciou rovnakého antigénu. Toto sa potom pridá na platňu, čo umožňuje protilátkam, ktoré sú stále voľné, reagovať s antigénom na platni. Po premytí komplexov protilátka-antigén vzorky sa pridá substrát.

Keď neznáma vzorka obsahuje veľa antigénu, bude menej protilátky, ktoré sa neviažu na platňu = nižší signál.