odpoveď:
Je to spôsob separácie rôznych proteínov na základe ich nábojových a väzbových vlastností k materiálu.
vysvetlenie:
Pri rôznych pH rôzne proteíny nesú rôzne náboje. Umiestnením zmesi proteínov pri nastavenom pH môžete mať zmes, ktorá obsahuje proteíny s rôznymi nábojovými vlastnosťami.
Ak sa táto zmes proteínov naleje na kolónu, ktorá obsahuje materiál s nábojom na nej, bude kolóna viazať proteíny v opačnom náboji.
Potom môžete použiť rôzne roztoky obsahujúce rôzne množstvá iónov na eluovanie (odlepenie) proteínov z kolóny.
Povedzme napríklad, že ste mali zmes proteínov, z ktorých chcete čistiť konkrétny proteín. Ak ste vedeli, že pri určitom pH je váš proteín, ktorý vás zaujíma, kladne nabitý, môžete zmes naliať na stĺpec, ktorý obsahuje záporne nabitý materiál.
Všetky proteíny, ktoré nenesú náboj alebo záporne nabité, by prúdili priamo kolónou. Potom by ste mohli uvoľniť svoj kladne nabitý proteín zaplavením stĺpca pozitívnymi iónmi, ktoré by doplnili záporný náboj na kolóne. Táto konkurencia by potom spôsobila, že proteín, o ktorý máte záujem, bude eluovaný.
Tu je príklad tohto diania.
Každá tácka obsahuje tlmivý roztok s rôznou koncentráciou a ako je možné vidieť v 175 mM vzorke (ľavý horný roh), veľmi málo červenohnedého proteínu sa naviazalo na nabitú membránu, pretože medzi iónmi v pufri a pufrom bola konkurencia. Proteín pre nabité väzbové miesta na membráne (Ióny v pufri "vyhrali", pretože je ich viac a tak zabránili väzbe proteínu). Vo vzorke v pravom dolnom rohu sa na membránu naviaže veľa proteínu, pretože je prítomných menej iónov, ktoré by súťažili o väzbové miesta.
V tomto videu môžete vidieť anionomeničovú chromatografiu v prevádzke: